技术文章
Technical articles
很多免疫学技术依赖于标记抗体的使用。对抗体进行标记主要是用于抗原的定位分析，在某些情况下，也可以对混杂有大量其他分子的样本中的抗原进行定量检测。由于抗体与其相应抗原具有很高的亲和力，因此带有易识别标记物的抗体可以定位分析抗原，并且是一种理想的快速价廉的定量测定方法。需要使用标记抗体的三种方法，即免疫染色法、免疫印迹法和免疫分析。此三种方法均能定位复杂混合物中的抗原，而且通过适当的对照也能定量测定。就免疫染色法而言，其目的就是定位正常细胞环境中出现的抗原。在此背景下，所有抗原均...
1．如果使用经免疫沉淀法得到的蛋白，按常规洗涤免疫复合物。尽可能*去除zui后的洗液。如果使用其他来源的蛋白，则将其转入20mmol／L的磷酸盐溶液中(pH7．0)，或直接在20／1l水中重悬蛋白。蛋白浓度应低于lmg／m1。2．加入20u1．5％SDS和20mmol／LDTI。3．加热至85C10min，仔细将上清液移入另一试管。4．加入10rd新鲜配制的0．2mmol／LN-乙基顺了烯二酰亚胺(NEM)，12．5mg／m1的水溶液为饱和溶液)，使用前临时配制。85℃温育1...
所有的固定方案必须做到：①防止抗原丢失；②透化细胞以便使抗体进入；③尽量使抗原保持能与抗体结合的状态；④维持细胞正常结构。常用的固定剂种类很多，固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。固定剂可分为两大类：有机溶剂和交联剂。有机溶剂如乙醇和丙酮能够去除脂类物质使细胞脱水，把蛋白质沉淀在细胞结构上。交联剂一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来，形成一个相互连接的抗原网。两种方法均使蛋白质抗原部分变性。因此，在细胞染色中，能够识别变性蛋白的抗体更加有用。在某些情况下...
1．主要内容纯化率为1000～10000倍?？焖俅炕乖阄鲋？芍馗词褂?。可获得纯化的抗原。不能用于定量测定。纯化效果取决于抗原的浓度和抗体的亲和力需要适当纯化的抗体。2．操作步骤(1)将抗体结合到蛋白A或蛋白G微珠上。对于一般用途的层析柱，每毫升湿的微珠大约可以结合2mg单克隆抗体或亲和纯化的多克隆抗体。将抗体和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的匀浆，在总量为10ml的溶液中加入大约lml微珠，室温孵育1h，轻轻摇动混匀。(2)用10倍体积的0．2mol／L硼酸钠(pH9...
标记蛋白具有许多优点。原则上，该方法为检测各种细胞成分中感兴趣的蛋白提供厂新的手段。①如果开放阅读框已经被克隆化，但是由于蛋白是新发现的，或者由于蛋白免疫原性较弱，目前尚没有针对该蛋白产物的抗体时，此标记技术具有重要的应用价值。随着基因组的研究，由基因工程进入蛋白工程，标记技术显得越来越重要。②由于标记物不是天然蛋白氨基酸序列的固有部分，与标记物结合的试剂在进行蛋白提纯过程中，对蛋白功能产生影响的可能性较小。③只要具备适当的载体，标记蛋白可在任何细胞中进行表达；例如，相同的标...
所谓Real-TimePCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。real-timePCR技术即实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物监测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已经被广泛用于监测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因...
摘要：云南农业大学动物科学技术学院近日成功育成10头携带绿色荧光蛋白和瘦素蛋白的转基因克隆猪引起各界广泛关注，2月3日记者在云南农业大学了解到，这一成果将有助于脂肪沉积以及人类肥胖病和糖尿病等疾病的研究，也将使转基因克隆技术在功能基因验证、疾病模型、异种器官移植等领域的应用前景更为广阔。云南农业大学动物科学技术学院近日成功育成10头携带绿色荧光蛋白和瘦素蛋白的转基因克隆猪引起各界广泛关注，2月3日记者在云南农业大学了解到，这一成果将有助于脂肪沉积以及人类肥胖病和糖尿病等疾病的...
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